Expresión del gen LOOS1 de Bjerkandera adusta regulado por el promotor inducible a estrógenos OlexA-46 en Arabidopsis thaliana

RESUMEN El aumento en el uso de combustibles fósiles ha generado situaciones a nivel mundial tales como el agotamiento de sus reservas, un aumento en las emisiones de gases con efecto invernadero, provocando un impacto en el cambio climático lo que genera una preocupación. Es por ello que se buscan alternativas para reemplazarlos como la producción de biocombustibles y uno de ellos es el bioetanol; una fuente de materia prima muy prometedora para su producción es la biomasa lignocelulósica, pero se necesita realizar un pretratamiento para desorganizarla y tener acceso a los azúcares fermentables. Existen diferentes métodos entre ellos están los biológicos los cuales son amigables con el medio ambiente. Se han investigado el uso de proteínas amorfogénicas las cuales desorganizan la celulosa cristalina, una de estas proteínas es la Loosenina la cual se aisló del hongo Bjerkandera adusta y se demostró que es una proteína amorfogénica y aumenta la liberación de azúcares reductores en sinergia con las endoglucanasas sin presencia de actividad hidrolítica utilizando celulosa cristalina. En este trabajo se pretende por lo tanto investigar el pretratamiento in planta bajo condiciones controladas y utilizando un sistema inducible para llevar a cabo la sacarificación. Para lograr esto, se realizaron dos construcciones utilizando la tecnología Gateway con el vector de expresión pMDC7 el cual presenta un promotor inducible por estrógenos. Como un control tenemos al plásmido pMDC7::GFP y como gen de interés pMDC7::PsCRLOOS1, con estas dos construcciones se llevó a cabo la transformación de Arabidopsis thaliana Col-0 con el método de inmersión floral mediante Agrobacterium tumefaciens. Posterior a esto se comprobó la presencia del transgen mediante PCR utilizando oligos específicos para cada gen. Una vez obtenida la generación F2 de las plantas se procedió a realizar la estandarización de la concentración a la cual se induce la expresión de los transgenes, se observó que a la concentración de 250 μM y 100μM se observa fluorescencia en las raíces de plántulas transformadas con el gen de GFP.