| dc.description | RESUMEN
El objetivo del presente estudio fue evaluar la actividad antihelmíntica in vitro de un extracto
hidroalcohólico y fracciones de la leguminosa Prosopis laevigata contra el nematodo de
ovinos Haemonchus contortus, así como la purificación e identificación de al menos un
constituyente químico responsable de la actividad nematicida. Se preparó una solución
hidroalcohólica de Agua-MeOH (70:30) a partir de hojas de P. laevigata y, posteriormente, el
extracto (E-HA) fue biparticionado con acetato de etilo (AcEt) para obtener dos fracciones:
una acuosa (F-Aq) y otra orgánica (F-AcEt); los disolventes se eliminaron y finalmente se
liofilizaron. El fraccionamiento químico de la F-AcEt se realizó por cromatografía de columna
abierta y de capa fina (CCA-CCF) utilizando diferentes sistemas de elución. El tamizaje
cualitativo fitoquímico del E-HA y F-Aq y F-AcEt se llevaron a cabo por técnicas de
reacciones químicas colorimétricas. Se usaron micrografías a partir de una cámara ultra digital
(AxioCam) acoplada a microscopía láser confocal, microscopía electrónica laser confocal
(MELC) y microscopía electrónica de barrido ambiental (MEBA). Para el seguimiento en el
aislamiento e identificación de los compuestos se usaron técnicas por análisis por HPLC
(high-performance liquid chromatography), espectrometría de gases masas y RMN 1H 13C.
Finalmente, el material biológico se obtuvo mediante técnicas coproparasitoscópicas usando
un ovino donador de huevos del parásito H. contortus, previamente infectado con larvas
infectantes (L3). La confrontación in vitro de huevos y larvas con el extracto hidroalcohólico
(E-HA), fracciones (Aq y AcEt), subfracciones y compuestos se llevaron a cabo en placas de
microtitulación de 96 pozos (n=4) a diferentes concentraciones. Se usaron controles negativos
agua destilada y MeOH al 2% (prueba ovicida) y MeOH al 4% (prueba larvicida), además de
ivermectina (0.5 mg/mL) como control positivo. Las lecturas se llevaron a cabo a las 48 h
2
(prueba ovicida) y 72 h (prueba larvicida) post-confrontación. Los resultados de las pruebas in
vitro se analizaron bajo un diseño completamente al azar a través de un análisis ANOVA
utilizando el modelo lineal general (GLM); se utilizó la prueba de Tukey para identificar
diferencias significativas entre tratamientos utilizando el programa SAS. Los resultados
mostrados por el E-HA en la prueba ovicida fueron cercanos al 100% a 25 mg/mL; mientras
que la F-AcEt mostró un efecto letal ovicida del 100% a 0.75 mg/mL. En contraste la F-Aq no
fue activa. Por otro lado, en la prueba del porcentaje de mortalidad (larvicida), el E-HA mostró
un 85% de mortalidad a 150 mg/mL, mientras que la F-AcEt a 50 mg/mL exhibió una
actividad larvicida del 96%; la F-Aq no mostró ninguna actividad. Los resultados de actividad
larvicida de las subfracciones evaluadas in vitro contra larvas L3 fueron los siguientes:
subfracción C1F1 a 15 mg/mL =79.47%; subfracción C2F1 a 7.5 mg/mL =100 %; subfracción
C2F2 a 7.5 mg/mL= 100 % y con la subfracción C2F3 a 15 mg/mL =100%. Por otro lado, los
compuestos como la luteolina y 4'-O-metilcatequina resultaron sin actividad ovicida, ni
larvicida. Por otro lado, la mezcla que correspodía a luteolina e isoramnetina exhibió una
elevada actividad ovicida del 96% a 0.15 mg/mL; en contraste, esta mezcla no registró
actividad larvicida. Mientras tanto, la isoramnetina fue la responsable de una actividad
nematicida del 100% contra huevos del parásito a una concentración de 0.07 mg/mL y contra
larvas mostró una mortalidad del 100% a 7.5 mg/mL. El tamizaje fitoquímico del E-HA, F-Aq
y F-AcEt reveló la presencia de alcaloides, flavonoides, taninos, terpenos/esteroles y
saponinas. En tanto, el análisis por CLAR del extracto, fracciones y subfracciones y
compuestos revelaron compuestos mayoritarios polares y de polaridad media correspondientes
a compuestos fenólicos entre ellos al grupo de flavonoides. Por espectrometría de gases masas
y RMN 1H y 13C se identificaron como luteolina, 4'-O-metilcatequina e isoramnetina. Las
micrografías tomadas por una cámara digital de alta resolución AxioCam, MELC y MEBA,
3
revelaron daños internos en huevos y larvas del parásito atribuidos al compuesto. Los
resultados de esta investigación demuestran que las hojas de la planta P. laevigata contiene un
flavonoide llamado isoramnetina con actividad antihelmíntica in vitro contra H. contortus.
Esta investigación es el primer informe detallado a nivel mundial acerca de la caracterización
química de un flavonoide presente en hojas de la planta P. laevigata con actividad
antiparasitaria in vitro, lo que podría ser una herramienta potencial prometedora contra la
hemoncosis ovina. | es_MX |
