Efecto del hidroxitirosol sobre los niveles de dopamina y recuperación funcional en el modelo de nado forzado de ratas tratadas con mpp+

RESUMEN La enfermedad de Parkinson (EP) es un desorden neurodegenerativo progresivo caracterizado por la pérdida irreversible de neuronas dopaminérgicas en la vía nigroestriada. La rigidez muscular, temblor en reposo, así como la pérdida y la lentitud de movimiento (acinesia y bradicinesia) son los principales signos motores de la EP a la que en un principio se le denominó “parálisis agitante”. La 1-metil-4-fenil-1,2,3,6tetrahidropiridina (MPTP) se usa para modelar la enfermedad en los primates, en los humanos se presentó alguna vez una intoxicación que llevó a una concisión semejante a la enfermedad, en la cual hay una disminución de los niveles de dopamina (DA) inducida por una pérdida neuronal dopaminérgica por un incremento del estrés oxidativo. Actualmente la EP es una enfermedad neurodegenerativa irreversible sin tratamiento farmacológico que la revierta. El hidroxitirosol es un polifenol con actividad biológica antioxidante, el cual se encuentra en productos naturales como la aceituna y en el aceite de oliva virgen en forma libre o en forma de éster, contribuyendo en un 70 a un 80% a la fracción fenólica total. Este compuesto es responsable junto con otros compuestos fenólicos del sabor amargo característico del aceite de oliva así como de su elevada estabilidad debido a la actividad antioxidante del hidroxitirosol. En el presente estudio muestra el efecto neuroprotector del hidroxitirosol en el modelo de nado forzado en rata. Se utilizaron ratas macho de la cepa Wistar (250-280 g; n=9/grupo) los cuales fueron divididos en 5 grupos con base en su tratamiento farmacológico: 1) grupo sham (S), 2) grupo control (C), 3) grupo hidroxitirosol (H), 4) grupo MPP+ (M) y 5) grupo MPP+/hidroxitirosol (MH). El día 1, todos los grupos recibieron una inyección intraestriatal. Mientras los animales del grupo S solo recibieron un daño mecánico; las ratas del grupo C recibieron una inyección por vía intravenosa (i.v.) de solución salina (1.5 mg/Kg) y 5 minutos después recibieron una inyección intraestriatal también de solución salina (8 L); los animales del grupo H recibieron por vía i.v. hidroxitirosol (1.5 mg/Kg) y solución salina (8 L) intraestriatalmente; las ratas del grupo M fueron inyectados estriatalmente con MPP+ (8 g/L); y finalmente, los animales del grupo MH fueron administrados por vía i.v. con hidroxitirosol (1.5 mg/Kg) y con MPP+ (8 L) por estriatalmente. Al quinto día posterior a la administración de MPP+ cada uno de los animales se sometieron a la pre prueba de nado forzado, para después evaluarse al sexto día en esta prueba. También, se evaluó en este día la motricidad y la conducta de giros ipsilaterales administrando apomorfina. 2 Finalmente se disectó la región cerebral cuerpo estriado derecho para la cuantificación de dopamina y HVA por HPLC con detección electroquímica. Los resultados muestran que una vez que fueron manipulados los animales con los diferentes tratamientos no presentaron ninguna alteración motora. Mientras que en la prueba de nado forzado mostró que el tratamiento de hidroxitirosol incrementó de manera significativa (p<0.05) la conducta de escalamiento (50%) de ratas tratadas con MPP+ en comparación con el grupo M que fue tratado sólo con MPP+. Así también dicho tratamiento con este fenilpropanoide disminuyó significativamente (p<0.05) la conducta de inmovilidad que fue de un 60%. Esta recuperación funcional de la administración de hidroxitirosol en el modelo de nado forzado de ratas tratadas con MPP+ fue corroborado con el incremento de los niveles de DA y HVA en comparación con los niveles de ratas tratadas sólo con la neurotoxina.

ABSTRACT Parkinson's disease (PD) is a progressive neurodegenerative disorder characterized by the irreversible loss of dopaminergic neurons in the nigrostriatal pathway. Muscle rigidity, tremor at rest, as well as loss and slowness of movement (akinesia and bradykinesia) are the main motor signs of PD that was initially called "agitation paralysis". 1-Methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) causes EP in humans and higher primates by decreasing dopamine (DA) levels induced by a neuronal dopaminergic loss by an increase in oxidative stress. Currently, PD is an irreversible neurodegenerative disease without any treatment that reverses it. Hydroxytyrosol is a polyphenol with antioxidant biological activity, which is found in natural products such as olives and virgin olive oil in free form or ester form, contributing 70 to 80% to the total phenolic fraction. This compound is responsible together with other phenolic compounds of the bitter taste characteristic of olive oil as well as its high stability due to the antioxidant activity of hydroxytyrosol. The present study shows the neuroprotective effect of hydroxytyrosol in the model of forced swimming in the rat. Male rats of the Wistar strain (250-280 g, n = 9 / group) were used, which were divided into 5 groups based on their treatment: 1) sham group (S), 2) control group (C), 3) MPP+ group (M), 4) hydroxytyrosol group (H) and 5) MPP+/hydroxytyrosol (MH). On day 1, all groups received an intrastriatal injection. While the animals of group S only received mechanical damage; the rats in group C received an intrastriatal injection of saline solution (8 μL) and another injection intravenously (i.v.) also saline (1.5 mg/Kg); the animals of group H received saline solution (8 μL) intrastriatally and i.v. hydroxytyrosol (1.5 mg/Kg) the rats of group M were injected striatally with MPP+ (8 μg/μL); and finally, the animals of the MH group were administered intrastriatally with MPP+ (8 μL) and hydroxytyrosol by i.v. (1.5 mg/Kg). On the fifth day after the administration of MPP+, each of the animals underwent the pretest for forced swimming, and then evaluated on the sixth day in this test. Also, motility and turn behavior was evaluated by administering apomorphine. Finally, the cerebral region of the right striatum was dissected for the quantification of dopamine HVA by HPLC with electrochemical detection. The results show that once the animals were manipulated with the different treatments they did not present any motor alteration. While in the forced swim test showed that the treatment of hydroxytyrosol significantly increased (p <0.05) the scaling behavior (50%) of rats treated with MPP+ compared to the group M that was 4 treated only with MPP+. Also, this treatment with this phenylpropanoid significantly decreased (p <0.05) the immobility behavior that was 60%. This functional recovery of the administration of hydroxytyrosol in the forced swimming model of rats treated with MPP+ was corroborated with the increase in DA and HVA levels compared to the levels of rats treated only with the neurotoxin. This study demonstrates the neuroprotective effect of hydroxytyrosol in the forced swimming model of rats treated with MPP+.