Modulación del fenómeno de resistencia a múltiples fármacos, por la acción de los compuestos fenólicos, galato de etilo y ácido tánico en células de carcinoma hepatocelular

RESUMEN La quimioterapia es uno de los principales tratamientos contra el cáncer, sin embargo su eficacia puede verse alterada debido a la presencia de efectos secundarios, falta de selectividad y la aparición de resistencia al tratamiento, siendo este último de gran importancia. Entre las principales causas de la resistencia se encuentra el fenómeno conocido como resistencia a múltiples fármacos (MDR por sus siglas en inglés), en este mecanismo ciertas proteínas transmembranales pertenecientes al grupo de transportadores ABC, como P-gp, MRP1 y BCRP, actúan como bombas de eflujo del fármaco, impidiendo que este alcance su concentración intracelular requerida para tener efecto terapéutico. Esto ha derivado diversas investigaciones en busca de agentes que logren sensibilizar células que presentan este mecanismo de resistencia, evaluando extractos o metabolitos de plantas, como él te verde y sus polifenoles, obteniendo resultados prometedores para revertir la resistencia a múltiples fármacos. El objetivo de este proyecto fue evaluar el efecto inhibitorio del galato de etilo y el ácido tánico, sobre el transportador de eflujo P-gp, asociado al mecanismo de resistencia a múltiples fármacos, en la línea celular Hep3B. Los ensayos de viabilidad celular mostraron un efecto quimiosensibilizante hacia paclitaxel (25 μM) al ser combinado con galato de etilo (50 μM) y ácido tánico (25 μM), utilizando verapamilo (44 μM) como control positivo, se observaron cambios en la CI50, siendo de 37.140 nM para paclitaxel solo, mientras que al ser combinado fue de 7.093 nM con verapamilo, 9.292 nM con galato de etilo y 0.508 nM con ácido tánico. En cuanto a la evaluación del efecto sobre la expresión de RNAm de P-gp, se observaron inhibiciones de 37.71 % con galato de etilo y 68.05 % con ácido tánico; el tratamiento de paclitaxel solo no mostró efecto inhibitorio, sin embargo al ser suministrado en combinación con galato de etilo o ácido tánico, se logró inhibir la expresión en un 69.5 y 73.3%, respectivamente. Finalmente ninguno de los compuestos mostró efecto sobre la actividad de eflujo de P-gp, ya que no se observaron cambios en la acumulación intracelular de doxorrubicina con los tratamientos evaluados. Los resultados obtenidos por el presente estudio sugieren que el galato de etilo y el ácido tánico presentan un efecto quimiosensibilizante a paclitaxel, aumentando su citotoxicidad además de inhibir la expresión de transcrito de P-gp.

ABSTRACT Chemotherapy is one of the main treatments against cancer; however its effectiveness can be altered due to the presence of side effects, lack of selectivity and the emergence of resistance to treatment, this latter being of great importance. Among the main causes of resistance is the phenomenon known as multidrug resistance (MDR), in this mechanism certain transmembrane proteins belonging to the group of ABC transporters, such as P-glycoprotein, MRP1 and BCRP, act as drug efflux pumps, preventing it reaches its intracellular concentration required to have therapeutic effect. Actually several investigations are focus in the search of agents to sensitize cells that have developed the MDR phenotype, then extracts and metabolites from plants, such as green tea and polyphenols, have been evaluated and some results showed to reverse the multidrug resistance. For this reason, the aim of this project was to evaluate the inhibitory effect of ethyl gallate and tannic acid in co-treatment with paclitaxel on the P-gp efflux transporter, associated with the mechanism of multidrug resistance, in the Hepatocellular carcinoma Hep3B cells. The analysis on cell viability showed a chemosensitizing effect towards paclitaxel (25 μM) when combined with ethyl gallate (50 μM) and tannic acid (25 μM), using verapamil (44 μM) as a positive control, a change in IC50 was observed, being 37.140 nM for paclitaxel alone, while combined with verapamil was 7.093 nM; 9.292 nM with ethyl gallate and 0.508 nM with tannic acid. In addition, an effect on the inhibition of the expression of mRNA of P-gp was observed; achieving an inhibition of 37.71% with ethyl gallate and 68.05% with tannic acid; paclitaxel treatments showed no inhibitory effect on expression, but when combined with ethyl gallate or tannic acid, expression was inhibited by 69.5 and 73.3%, respectively. Finally, no effect was observed on P-gp efflux activity, as no changes were found in the intracellular accumulation of doxorubicin with the ethyl gallate and tannic acid treatments but changes statistical significant were observed with verapamil. The results obtained by the present study suggest that ethyl gallate and tannic acid induce a chemosensitizing effect to paclitaxel treatment, increasing its cytotoxicity as well as inhibiting the expression of P-gp transcript.