Obtención de precursores neurales a partir de fibroblastos humanos mediante el uso de señales de inducción neural

Las enfermedades neurodegenerativas (EN) y demás afecciones del sistema nervioso que ocasionan un daño celular, han ido aumentando en el número de muertes generadas a lo largo de los años; del octavo puesto en 2010 al quinto en 2016 según el reporte de la OMS de EN de 2017. Anteriormente se ha demostrado que es posible trasplantar células que permiten restablecer la función celular afectada en pacientes con EN. En el año 1987 mediante ensayos clínicos se logró una mejoría del 50% de los pacientes con enfermedad de Parkinson que recibieron un trasplante de células nerviosas obtenidas de fetos, debido a estos resultados se planteó su empleo como alternativa terapéutica, sin embargo, la cantidad de células a trasplantar en cada paciente es una limitante, porque al ser la fuente celular cerebros fetales, producto de abortos, no se consideró un tratamiento ético para su uso clínico. Por lo que se han buscado fuentes celulares alternas como xenotrasplantes, donadores adultos, cadáveres y trasplantes autólogos, siendo estos últimos la mejor opción ya que no presentan efectos adversos de inmunogenicidad, baja disponibilidad, ni están sometidos a problemas éticos para su obtención. El presente estudio está centrado en el desarrollo de una metodología de cultivo celular que mediante el uso de distintas señales de inducción neural permita generar una población que presente el potencial de diferenciación similar a precursores neurales a partir de fibroblastos humanos. Este proyecto está basado en la implementación de distintas estrategias que no modifiquen genéticamente las células. La formación de agregados celulares en cultivo tridimensional para favorecer los eventos de reprogramación celular, el uso de moléculas pequeñas como inductores neurales, medios definidos con señales extracelulares obtenidos de neuroblastos y técnicas de cocultivo para promover la diferenciación, sobrevivencia y/o proliferación de precursores neurales. El primer paso de este protocolo consiste en la propagación y obtención de un cultivo de fibroblastos estable en cuanto a características morfológicas y de expresión de marcadores de esta población. Posteriormente, se cultivan las células para promover la formación de agregados celulares, los cuales se exponen a una mezcla de fármacos que alteran vías de señalización claves en la inducción neural, entre las que se encuentran Wnt y TGF-β; además de la inhibición de deacetilasas y metilasas de histonas; esto permite que las células adquieran una cromatina más permisiva, lo cual promovió un fenotipo parecido a células del neuroectodermo. Una vez favorecido el evento de inducción neural se cultivan las células obtenidas de los agregados en un microambiente que permite el crecimiento y la manutención de las células con expresión de marcadores de progenitores neurales; esto mediante el uso de cocultivo con células endoteliales y medio de cultivo obtenido de neuroblastomas.