Caracterización bioquímica parcial y funcional de las proteínas de secreción de 70 kda derivadas de larvas l4 del nematodo haemonchus placei

JOCELYN MAZA LOPEZ

RESUMEN La producción pecuaria bajo sistemas de pastoreo en clima tropical, favorece las infecciones por nematodos como Haemonchus placei. Por esta razón, se ha buscado el desarrollo de otras alternativas de control, como es el uso de agentes inmunizantes involucrados en la inducción de una respuesta inmune madura frente a infecciones parasitarias. El objetivo del presente estudio fue analizar el perfil de proteínas de los productos de secreción (ESP) derivados del primer estadio endoparásito de H. placei y su efecto en diferentes factores inmunes, así como de las poblaciones de linfocitos TCD4+ y T+. Se realizó la obtención e identificación molecular de H. placei para la preparación de los ESP del cuarto estadio (L4) a las 24 h de cultivo in vitro. Se determinaron características bioquímicas de los productos por peso molecular, punto isoeléctrico y actividad de proteasas. Asimismo, se evaluó su función en diferentes factores inmunes por expresión relativa (IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, IFN, TGFβ, FCεR1A, β-2 microglobulina) y citometría de flujo (CD4+, T+ e IL-4). La cuantificación de la expresión se realizó por Retro Transcripción y PCR en Tiempo Real (RT-qPCR) en células sanguíneas mononucleares (PBMC´s) activadas con ESP. El análisis del efecto de los ESP de H. placei sobre el porcentaje de linfocitos TCD4+, Tγδ+ e IL-4 se realizó por citometria de flujo a las 24 y 48 h post estimulación. Los resultados del perfil de proteínas de los ESP muestran dos bandas de 15 y 70 kDa. La banda de 70 kDa presentó actividad enzimática, contrariamente a la banda de 15 kDa. El análisis de expresión relativa de IL-5, IL-6, IL-13, IL-4 y FCεR1A sugiere que las proteínas de 15 kDa tienen una activa participación en la respuesta inmune tipo TH2. En contraste, las proteínas de 70 kDa parecen activar mecanismos inmunes regularorios relacionados a procesos inflamatorios a través de IL-8, TGFβ1 e IFN, y por la estimulación de linfocitos TCD4+ a las 24 h y de Tγδ+ a las 24 y 48 h. Cabe mencionar que ambos tipos de linfocitos están relacionados a la funcionalidad de la respuesta inmune tipo TH2 a nivel de la mucosa gastrointestinal, situación que es relevante en este tipo de parasitosis y que podría estar asociada a los ESP de la L4 de H. placei indicando su posible actividad biológica durante la interacción hospedero-parásito

Tipo de documento: Tesis de maestría

Formato: Adobe PDF

Audiencia: Maestros

Idioma: Español

Área de conocimiento: BIOLOGÍA Y QUÍMICA

Campo disciplinar: CIENCIAS DE LA VIDA

Nivel de acceso: Acceso Abierto