Comparación de la expresión del anticuerpo scfv 6009f en pichia pastoris x-33 utilizando los plásmidos ppiczaα y ppicza

RESUMEN El desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas ha incrementado a lo largo de los últimos años, tal es el caso de la generación de anticuerpos más eficaces gracias a las nuevas tecnologías. Existen diversos formatos de anticuerpos, tal es el caso de los fragmentos de cadena sencilla, que gracias a su tamaño pequeño presenta ventajas importantes tales como: una mejor distribución, menor inmunogenicidad y facilidad de eliminación. En 2005 a partir de una librería de fagos surge una variante de fragmento de cadena sencilla scFv llamada 6009F, proveniente de sangre periférica humana, este anticuerpo es capaz de reconocer el veneno de Centruroides noxius y la toxina Cn2; por lo que es de gran importancia su producción, por lo que en este trabajo se ha empleado la utilización de un sistema de expresión de proteínas heterólogas como es la levadura de Pichia pastoris, ya que este modelo de expresión proporciona ciertas ventajas en comparación con otros sistemas tales como la capacidad de ser inducida por metanol y de esta forma favorecer a la generación de proteínas heterólogas, fácil mantenimiento, al ser un organismo eucarionte tiene la maquinaria celular para realizar modificaciones postraduccionales tales como la glicosilación. En este trabajo se utilizó la cepa de P. pastoris X-33 inducible por metanol la cual se transformó con los plásmidos pPICZA (expresión intracelular) y PICZAα (expresión extracelular); la expresión se llevó a cabo en reactor de 1L y en matraces de 500mL. Los resultados arrojaron que utilizando el plásmido PICZAα no fue posible purificar la proteína scFv6009F mediante una columna de afinidad a níquel, ya que en los geles SDS-PAGE no se observó su presencia en ninguna de las concentraciones de imidazol utilizadas para su elusión durante su purificación en columnas de Niquel, ni tampoco se pudo identificar en Western Blot utilizando el anticuerpo anti-His. Mientras que los experimentos con el plásmido pPicZA de expresión intracelular están en proceso