Expresión heteróloga de una alfa-neurotoxina de la serpiente micruroides euryxanthus en escherichia coli y la construcción de un vector para su expresión en nicotiana tabacum

Resumen El 20% de las serpientes distribuidas a nivel mundial son venenosas y están clasificadas en 5 familias principales de las cuales solo la familia elapidae y viperidae son consideradas de importancia médica. La familia elapidae está representada por mambas, cobras, bungarus y serpientes de coral o coralillos. Las serpientes de coral en América se clasifican en tres géneros distintos, Micrurus, Leptomicrurus y Micruroides. La especie Micruroides euryxanthus se distribuye en México en los estados de Sinaloa, Sonora, Chihuahua y Coahuila, sin embargo, pese a no ser considerada una especie potencialmente peligrosa es importante conocer los componentes tóxicos que abundan en su veneno y con base en ello analizar la relación evolutiva de esta especie con las serpientes del género Micrurus. En el presente trabajo se obtuvieron 18 secuencias totales de toxinas de tres dedos (3FTXs) a partir del RNA de las glándulas de veneno de M. euryxanthus, posteriormente se clasificaron en 6 grupos distintos de secuencias con base en su función y características. Las toxinas de tipo I o α-neurotoxinas (MTx6, MTx7 y MTx18) se compararon a nivel de secuencia con diferentes α-neurotoxinas reportadas en el veneno de distintos elápidos del mundo, así como toxinas expresadas heterólogamente. A partir de los análisis in sílico se seleccionó la toxina MTx18 la cual se clonó en el vector pQE30 para su expresión en el modelo de E. coli. La α-neurotoxina recombinante (rMTx 18) se expresó en la cepa SHuffle en forma soluble y activa con un rendimiento final de 2.6 mg/litro de medio de cultivo y una dosis letal media de 8.3 μg/ratón. Los sueros de conejos hiperinmunizados con la toxina recombinante neutralizaron la actividad de la toxina con una dosis efectiva media de 224.3 μl de suero de conejo/ratón. Se logró clonar el gen de la toxina MTx18 de M. euryxanthus en el vector de transformación de plantas pK2GW7 para su posterior expresión en tabaco.