Degradación de colorantes industriales (azul de coomassie, azul de bromofenol y rojo congo), mediante una cepa transgénica de pichia pastoris que expresa la lacasa de coriolopsis gallica.

Resumen En la actualidad el uso de colorantes industriales, ha aumentado debido a la demanda de estos en varios sectores, provocando la contaminación de lagos y suelos por la ineficiencia del tratado de sus residuos. Debido a esta problemática se han realizado diversos estudios para la remoción de estos remanentes. Por lo tanto se realizó el siguiente trabajo, en el cual se utilizaron tres colorantes importantes en la industria textil: azul de coomassie utilizado también en laboratorios de biología molecular para la cuantificación de proteínas, azul de bromofenol utilizado en tinciones histológicas y el colorante rojo congo, el cual se ha demostrado que es un potencial carcinogénico. La remoción de estos tintes fue llevada a cabo por dos lacasas de Coriolopsis Gallica (mutante y silvestre) expresadas en Pichia pastoris. Los experimentos se realizaron en medios de cultivos con CuSO4 el cual es un cofactor de la enzima, y metanol como fuente de carbono e inductor del vector α- fLcCg-pPICZB. Se utilizaron dos controles P. pastoris con el vector vació y sin el vector. Durante el procedimiento se midió la actividad volumétrica de lacasa, el crecimiento de las cepas y la disminución de la absorbancia en los colorantes. En los resultados se observó una degradación por unidad enzimática del colorante azul de comassie de 2.47% por la lacasa silvestre y 19.4% por la lacasa mutante, la decoloración del tinte azul de bromofenol fue de 6.8% por la lacasa silvestre y por la mutante fue de 7%, en el caso del colorante rojo congo el porcentaje de degradación fue de 13.2% (lacasa silvestre) y 14.3% (lacasa mutante). Un punto importante en esta investigación, fue la observación de la biosorción de la levadura por los colorantes, esto fue confirmado en los porcentajes de remoción total de los controles, donde se observa una remoción promedio del colorante azul de coomassie de 44.2%, 25% (colorante azul de bromofenol) y 68% (rojo congo). 11

Summary Currently the use of industrial dyes has increased due to the demand of these in various sectors, causing the contamination of lakes and soils by the inefficiency of the treaty of their waste. Due to this issue several studies have been carried out for the removal of these remnants. Therefore, the following work was carried out, using three important dyes in the textile industry: coomassie blue also used in molecular biology laboratories for the quantification of proteins, bromophenol blue used in histological stains and congo red dye, which has shown to be a carcinogenic potential. The removal of these dyes was carried out by two laccases of Coriolopsis Gallica (mutant and wild) expressed in Pichia pastoris. The experiments were performed in culture media with CuSO4 which is a cofactor of the enzyme, and methanol as a carbon source and inducer of the vector α-fLcCgpPICZB. Two P. pastoris controls were used with the empty vector and without the vector. During the procedure, the laccase volumetric activity, the growth of the strains and the decrease of the absorbance in the dyes were measured. In the results, the degradation by enzymatic unit of the coomassie blue dye was 2.47% by the wild laccase and 19.4% by the mutant laccase, the discoloration of the bromophelon blue dye was 6.8% by the wild laccase and by the mutant was 7%, in the case of congo red dye, the degradation percentage was 13.2% (wild house) and 14.3% (mutant laccase). An important point in this investigation was the observation of the biosorption of the yeast by the dyes, this was confirmed in the percentages of total removal of the controls, where an average removal of the coomassie blue dye was 44.2%, 25% was observed in the blue bromophenol dye and 68% Congo red