Evaluación farmacológica de β-Hidroxifosfocarnitina en la esteatohepatitis no alcohólica inducida en ratas

El objetivo del proyecto fue evaluar el efecto farmacológico de β-HFC en la esteatohepatitis no alcohólica inducida en ratas. Introducción: La esteatohepatitis no alcohólica (EHNA) es una enfermedad que se caracteriza por la presencia de esteatosis, inflamación y fibrosis progresiva. El amplio espectro de alteraciones que caracterizan a EHNA, dificultan su tratamiento. Actualmente no hay una farmacoterapia específica para el tratamiento de la EHNA. Pioglitazona es un fármaco dado en la clínica para la EHNA, pero está asociado a graves efectos secundarios, por lo que hay una necesidad en el desarrollo de un fármaco efectivo para el tratamiento de la EHNA. β-HFC un análogo de L-carnitina ha demostrado tener efecto en reducir alteraciones del síndrome metabólico, estrechamente relacionado con el desarrollo de EHNA, por lo que se evaluó su efecto en ratas con EHNA. Método: EHNA fue desarrollada en ratas Wistar macho, mediante la administración de una solución alta en fructosa, grasas saturadas y tetracloruro de carbono. Se dividieron en 6 grupos; EHNA, EHNA-pioglitazona, EHNA-β-HFC y sus respectivos controles de ratas sanas. La evaluación del desarrollo de la EHNA se realizó en cortes histológicos de hígado mediante la tinción H&E y tricromica de Masson. Se evaluó el efecto de β-HFC sobre los parámetros bioquímicos y de enzimas indicadoras de daño hepático. Se observó la expresión de SREBP-1c, α-SMA y de citocinas inflamatorias IL-1β y TNF-α en tejido hepático mediante inmunohistoquímica. Se cuantificó la acumulación de glucógeno hepático por medio de la tinción PAS y se comprobó por un método químico. Resultados: La EHNA fue comprobada por la presencia de alteraciones características de la enfermedad; esteatosis, inflamación, necrosis y la formación de hepatocitos en balón las cuales fueron observadas en el análisis histológico; así como fibrogénesis, y el desarrollo de inflamación, que se comprobó por el aumento en la expresión de IL-1β y TNF-α. El efecto de β-HFC sobre la EHNA se demostró por la atenuación de las alteraciones observadas en el análisis histológico. La reducción de la expresión de IL-1β y TNF-α indicó disminución de la inflamación lo que se vio reflejado en un menor grado de fibrosis. La reducción de la fibrosis fue comprobada por la evaluación de la activación de las CEH, a través de la expresión de α-SMA. La β-HFC disminuyó la acumulación de glucógeno hepático aumentado por la administración de fructosa en las ratas con EHNA, lo que nos indicó que β-HFC podría estar aumentando la beta oxidación de AG. Se evaluó el efecto de β-HFC sobre la LDN, a través de la expresión de SREBP-1c, que se observó aumentada por el desarrollo de EHNA y disminuida por el efecto de β-HFC. La reducción de SREBP-1c, podría justificar la reducción de la esteatosis y TG y como consecuencia la mejora de todas las alteraciones hepáticas desencadenadas por el desarrollo de EHNA. Conclusión: El efecto de β-HFC sobre el metabolismo lipídico disminuyó la esteatosis, inflamación y fibrosis en ratas con EHNA.

The aim of the project was to evaluate the pharmacological effect of β-HFCs on non-alcoholic steatohepatitis induced in rats. Introduction: Non-alcoholic steatohepatitis (NASH) is a disease characterized by the presence of steatosis, inflammation and fibrosis. The wide spectrum of alterations that characterize NASH make its treatment difficult. Currently there is no specific pharmacotherapy for the treatment of NASH. Pioglitazone is a drug given in the clinic for NASH, but it is associated with serious side effects. Furthermore, it has a high prevalence, so there is an urgent need for the development of an effective drug for the treatment of NASH. β-HFC, an analog of L-carnitine, has been shown to have an effect in reducing alterations in the metabolic syndrome, closely related to the development of NASH, so its effect was evaluated in rats with NASH. Method: NASH was developed in male Wistar rats, by administering a high fructose solution, saturated fat and carbon tetrachloride. They were divided into 6 groups; NASH, NASH-pioglitazone, NASH-β-HFC and their respective controls from healthy rats. The evaluation of the development of NASH was performed in liver histological sections using H&E and Masson's trichrome staining. The effect of β-HFC on biochemical parameters and enzymes that indicate liver damage was evaluated. Expression of SREBP-1c, α-SMA, and inflammatory cytokines IL-1β and TNF-α was observed in liver tissue by immunohistochemistry. Liver glycogen accumulation was quantified by PAS staining and verified by a chemical method. Results: The development of the NASH model was verified by the presence of characteristic alterations of NASH. Steatosis, inflammation, necrosis, and ballooning of hepatocytes were observed on histological analysis of NASH rats. Fibrogenesis was observed as a consequence of the damage, and the development of inflammation was confirmed by the increase in the expression of IL-1β and TNF-α. The effect of β-HFC on NASH was demonstrated by the attenuation of the alterations seen on histological analysis. The reduction in the expression of IL-1β and TNF-α indicated a decrease in inflammation, which was reflected in a lower degree of fibrosis. The reduction of fibrosis was confirmed by the evaluation of the activation of HSCs, through the expression of α-SMA. β-HFC decreased hepatic glycogen accumulation increased by fructose administration in NASH rats, indicating that β-HFC could be increasing FA beta oxidation. The effect of β-HFC on LDN was evaluated through the expression of SREBP-1c, which was observed to be increased by the development of NASH and decreased by the effect of β-HFC. The reduction of SREBP-1c could justify the reduction of steatosis and TG and, as a consequence, the improvement of all the liver alterations triggered by the development of NASH. Conclusion: The effect of β-HFC on lipid metabolism decreased steatosis, inflammation and fibrosis in rats with NASH.