Evaluación de Daldinia eschscholtzii en la cicatrización de un modelo in vivo

El objetivo del presente proyecto fue evaluar ungüentos de Daldinia eschscholtzii (Ehrenb.) Rehm. en la cicatrización de un modelo in vivo. Se realizó la identificación molecular de la cepa HEMIM-90. Se evaluó la velocidad de crecimiento (VC) de D. eschscholtzii en sustratos al 100 %: S1) rastrojo de maíz, S2) hoja de aguacate, S3) rastrojo de jitomate, S4) aserrín de encino y además en mezclas de rastrojo de maíz, de jitomate y hoja de aguacate en proporciones: M1) 40 %/30 %/30 %, M2) 50 %/ 25 %/25 %, M3) 60 %/20 %/20 % y M4) 70 %/15 %/15 %. Se cultivó D. eschscholtzii en rastrojo de maíz con salvado de trigo 90/10 (C1) y en una mezcla de rastrojo de maíz, de jitomate y hoja de aguacate en proporción 60 %/20 %/20 % (C2). Los estromas cosechados de C1 y C2 se deshidrataron y trituraron para obtener polvo (Pol). Se realizaron extractos (Ext) hidroalcohólicos con etanol al 70 % agregando 10 % de polvo proveniente de ambos cultivos (ExtC1 y ExtC2). Los extractos se concentraron en rotaevaporador y se liofilizaron. Posteriormente de PolC1, PolC2, ExtC1 y ExtC2 se realizaron pruebas colorimétricas de metabolitos secundarios, pruebas de toxicidad con el nematodo Panagrellus redivivus y se elaboraron ungüentos (UPolC1, UPolC2, UExtC1 y UExtC2) a una concentración de 75 mg/mL utilizando el cicatrizante comercial ULCODERMA® (Ul) como control positivo y la base del ungüento (BU) como control negativo. Los ungüentos se aplicaron cada 24 h en heridas de ratones BALB/c y se midió el largo y ancho de la herida los días 1, 3, 7, 11, 14 y 17. Una vez cicatrizado se sacrificaron los ratones y se evaluaron los órganos macroscópicamente. Por último, se realizó espectrofotometría de gases masa (GC/MS) de las muestras: PolC1, PolC2, ExtC1 y ExtC2. La cepa se identificó como D. eschscholtzii (acceso al banco de genes OP735354). La VC en sustratos al 100 % fue menor en S4 con 0.17 mm/h y S1, S2 y S3 fueron muy parecidos (0.26-0.27 mm/h). La VC en mezclas fue más alta para M1 (0.31 mm/h) y M3 (0.29 mm/h), la más baja se presentó en M2 (0.14 mm/h) y M4 (0.22 mm/h). El C1 obtuvo una EB de 28.34 % y una TP de 0.51, el C2 una EB de 36.26 y una tasa de producción de 0.77. Las pruebas colorimétricas mostraron metabolitos secundarios como: saponinas, triterpenos, cumarinas y alcaloides. Tanto polvos como extractos presentaron una toxicidad inferior al 20 % por lo que no se consideraron tóxicos. El ExtC1 en el día 1 presentó un mayor porcentaje de contracción (10 %) y el PolC1 en el día 3 (16 %). En la evaluación macroscópica de los órganos de los ratones no se observó alteración o daño. En total se encontraron 26 compuestos por GC/MS. El hongo D. eschscholtzii presentó actividad cicatrizante por lo que pueden explorarse sus propiedades terapéuticas además al no presentar toxicidad se puede utilizar también en el área alimenticia con mayor seguridad.

The aim of this project was to evaluate ointments from Daldinia eschscholtzii (Ehrenb.) Rehm. for healing in an in vivo model. Molecular identification of the HEMIM-90 strain was performed. The growth rate (VC) of D. eschscholtzii was evaluated in 100 % substrates: S1) corn stubble, S2) avocado leaf, S3) tomato stubble, S4) oak sawdust and also in mixtures of corn stubble, tomato and avocado leaf in proportions: M1) 40 %/30 %/30 %, M2) 50 %/25 %/25 %, M3) 60 %/20 %/20 % and M4) 70 %/15% /15 %. D. eschscholtzii was cultivated in corn stubble with 90/10 wheat bran (C1) and in a mixture of corn stubble, tomato, and avocado leaf in a 60/20/20 % ratio (C2). Harvested stroma from C1 and C2 were dehydrated and ground to obtain powder (Pol). Hydroalcoholic extracts (Ext) were made with 70 % ethanol adding 10 % of dust from both cultures (ExtC1 and ExtC2). The extracts were concentrated in a rotary evaporator and lyophilized. After PolC1, PolC2, ExtC1 and ExtC2, colorimetric tests for secondary metabolites, toxicity tests with the Panagrellus redivivus nematode, and ointments (UPolC1, UPolC2, UExtC1 and UExtC2) were made at 75 mg/mL concentration using the commercial healing ULCODERMA® (Ul) as a positive control and ointment base (BU) as a negative control. The ointments were applied every 24 h to the wounds of BALB/c mice and the length and width of the wound were measured on days 1, 3, 7, 11, 14 and 17. Once healed, the mice were sacrificed and the organs were evaluated macroscopically. Finally, gas mass spectrophotometry (GC/MS) was performed on the samples: PolC1, PolC2, ExtC1 and ExtC2. The strain was identified as D. eschscholtzii (gene bank access OP735354). The VC in 100 % substrates was lower in S4 with 0.17 mm/h and S1, S2 and S3 were very similar (0.26-0.27 mm/h). The VC in mixtures was highest for M1 (0.31 mm/h) and M3 (0.29 mm/h), the lowest was presented in M2 (0.14 mm/h) and M4 (0.22 mm /h). The C1 obtained an EB of 28.34 % and a TP of 0.51, the C2 an EB of 36.26 and a production rate of 0.77. Colorimetric tests showed secondary metabolites such as: saponins, triterpenes, coumarins and alkaloids. Both powders and extracts had a toxicity of less than 20 %, so they were not considered toxic. The ExtC1 on day 1 presented a higher percentage of contraction (10 %) and the PolC1 on day 3 (16 %). In the macroscopic evaluation of the organs of the mice, no lesions or damage were observed. In total, 26 compounds were found by GC/MS. The D. eschscholtzii fungus presented healing activity, so its therapeutic properties can be explored. Also, since it does not present toxicity, it can also be used in the food area with greater safety.