| dc.rights.license | http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0 - Atribución-NoComercial | es_MX |
| dc.contributor | MARIA DEL RAYO SANCHEZ CARBENTE | es_MX |
| dc.contributor.author | MARÍA GUADALUPE MORALES MORALES | es_MX |
| dc.contributor.other | director - Director | es_MX |
| dc.coverage.spatial | MEX - México | es_MX |
| dc.date | 2022-06-13 | |
| dc.date.accessioned | 2022-09-30T00:34:46Z | |
| dc.date.available | 2022-09-30T00:34:46Z | |
| dc.identifier.uri | http://riaa.uaem.mx/handle/20.500.12055/2657 | |
| dc.description | La prospección y caracterización de enzimas generan información relevante para
obtener alternativas que otorguen mayor eficiencia catalítica para la producción de
compuestos orgánicos interesantes. Las enzimas lipolíticas bacterianas (lipasas y
esterasas) presentan actividades de síntesis y/o hidrólisis de una amplia variedad
de sustratos esterificados. En el laboratorio de Biología Molecular de Hongos se
realizó la caracterización bioquímica de una esterasa HSL que fue aislada a partir
de una librería de cDNA del hongo Basidiomiceto Bjerkandera adusta crecido en
petróleo crudo, la cual fue denominada BaEstB. Se demostró que tiene una
preferencia por cadenas acilo 2C, sin embargo, su actividad se reduce hasta 18
veces frente al p-NPA, e incluso muestra regioselectividad inclinada por el 2-NA que
para 1-NA. Entonces se propuso que la especificidad pudiera verse influenciada por
la parte alcohol del sustrato. Posteriormente, se demostró a través de estudios in
silico y de HPLC que esta enzima es capaz de hidrolizar el ergoesteroil-acetato.
Además, a partir de un análisis de “docking” se determinó que las líneas mutantes
(Y81S y L211W) son capaces de utilizar sustratos de cadena acilo mayor a 2C,
como ha sido demostrado por la enzima ortóloga RmEstB del hongo mucoral
Rhizomucor miehei. En este proyecto se logró la inducción de la BaEstB wt y de las
líneas mutantes a las 72 h. Dada la notable preferencia de la BaEstB wt por el 2-
NA, se utilizó para determinar el valor de Km que fue de 20 uM y una velocidad de
1x10-6 umol/min. Es importante comparar la actividad de la BaEstB wt y sus líneas
mutantes a determinada concentración del ergosteroil acetato, 1-NA, 2-NA y p-NPA
y poder dilucidar la preferencia entre estos sustratos, e incluso establecer una
correlación con los residuos de aminoácidos que se encuentran en el túnel de
entrada al sitio activo. Esto permitiría una caracterización completa, evaluando tanto
sustratos comerciales como naturales, y podría darnos indicios de si el ergosterol
acetilado es su sustrato celular. Este estudio pone en perspectiva la necesidad de
evaluar la especificidad de este tipo de enzimas en sustratos no convencionales
como los esteroles esterificados y los alcoholes terciarios. Por lo que hipotetizamos
que la HSL BaEstB será una enzima que podría ser utilizada para la obtención de
compuestos orgánicos interesantes. | es_MX |
| dc.description | ABSTRACT
Enzyme prospection and characterization can generate relevant information that
could obtain alternatives that provide greater catalytic efficiency. for the production
of interesting organic compounds. Bacterial lipolytic enzymes (lipases and
esterases) they present activities of synthesis and/or hydrolysis of a wide variety of
esterified substrates. The biochemical characterization of an HSL esterase was
made in the Laboratory of Molecular Biology of Fungi; was isolated from a cDNA
library of the fungus Basidiomycete Bjerkandera adusta grown in crude oil, which
was named BaEstB. It was shown to prefer 2C acyl chains; however, its activity is
reduced to 18-fold against p-NPA, and it even shows inclined regioselectivity for 2-
NA than for 1-NA. It was proposed the alcohol part of the substrate could be
influenced by the specificity. Subsequently, through in silico and HPLC studies this
enzyme was shown the capacity of hydrolyzing ergosteroyl-acetate. In addition, from
a docking analysis it was determined that the mutant lines (Y81S and L211W) are
capable of using substrates with an acyl chain reater than 2C, as has been
demonstrated by the orthologous enzyme RmEstB of the mucoral fungus
Rhizomucor miehei. In this project, the induction was achieved of BaEstB wt and of
the mutant lines at 72 h. Given the notable preference of wt BaEstB for 2-NA, it was
used to determine the value of Km which was 20 μM and a rate of 1x10-6 μmol/min.
It is important to determine the activity of BaEstB wt and its mutant lines at a certain
concentration of ergosteroyl acetate, 1-NA, 2-NA and p-NPA, in order to compare
them and be able to elucidate the preference between these substrates, and even
establish a correlation with the amino acid residues found in the entry tunnel to the
active site. Thus, its characterization would be more complete, since commercial
and natural substrates are evaluated, resolving whether ergosterol fulfills a
physiological role. This characterization could be a guideline to explore the specificity
in unconventional substrates such as esterified sterols and tertiary alcohols.
Proposing BaEstB as a candidate or one of its mutant lines as alternatives for
obtaining interesting organic compounds. | es_MX |
| dc.format | pdf - Adobe PDF | es_MX |
| dc.language | spa - Español | es_MX |
| dc.publisher | El autor | es_MX |
| dc.rights | embargoedAccess - En Embargo | es_MX |
| dc.subject | 6 - CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA | es_MX |
| dc.subject.other | 31 - CIENCIAS AGRARIAS | es_MX |
| dc.title | Evaluación de la preferencia de la HSL BaEstB sobre el 2-naftil acetato vs p-nitrofenil acetato mediante parámetros cinéticos | es_MX |
| dc.type | masterThesis - Tesis de maestría | es_MX |
| uaem.unidad | Centro de Investigación en Biotecnología (CEIB) - Centro de Investigación en Biotecnología (CEIB) | es_MX |
| uaem.programa | Maestría en Biotecnología - Maestría en Biotecnología | es_MX |
| dc.type.publication | acceptedVersion | es_MX |
| dc.audience | researchers - Investigadores | es_MX |
| dc.date.embargoed | 2023-01-31 | |
| dc.date.received | 2022-06-24 | |
