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Función y mecanismos de acción de SLAMF7 (CRACC) en células citotóxicas humanas
| dc.rights.license | http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0 - Atribución-NoComercial | es_MX |
| dc.contributor | MARIO ERNESTO CRUZ MUÑOZ | es_MX |
| dc.contributor.author | ARTURO GUTIERREZ GUERRERO | es_MX |
| dc.contributor.other | director - Director | es_MX |
| dc.coverage.spatial | MEX - México | es_MX |
| dc.date | 2022-05-05 | |
| dc.date.accessioned | 2022-05-19T16:40:06Z | |
| dc.date.available | 2022-05-19T16:40:06Z | |
| dc.identifier.uri | http://riaa.uaem.mx/handle/20.500.12055/2352 | |
| dc.description | Resumen Las células Natural Killer (NK) juegan un papel esencial en la inmunidad contra tumores e infecciones virales a través de dos mecanismos fundamentales: secreción de citocinas y función citotóxica. Por lo tanto, una mejor caracterización de los mecanismos moleculares y celulares que regulan estos procesos es de gran importancia para evaluar la modulación de sus funciones efectoras en el ámbito clínico. Por su parte, la familia de proteínas SLAM es un grupo de receptores transmembranales que se expresan de forma diferencial en las células hematopoyéticas. Las células NK expresan varios miembros de la familia SLAM, dentro de los cuales, los receptores 2B4 y SLAMF7 son los mejor estudiados. En el modelo murino, la expresión del ligando de SLAMF7en la célula diana, estimula la función citotóxica de las células NK a través de un mecanismo dependiente de la proteína adaptadora EAT-2, sin embargo, se desconoce si la función y modos de acción de SLAMF7 están conservados en células NK humanas. Estudios previos en células NK de origen humano mostraron que el entrecruzamiento de SLAMF7 en la superficie de las células NK, mediante el empleo de anticuerpos específicos, estimula la función citotóxica de las células NK. Así mismo, se observó que la expresión de SLAMF7 en células tumorales que carecen de moléculas del MHC-I son eliminadas más eficientemente por células NK en comparación de su contraparte, que no expresa SLAMF7. Estos resultados sugieren que SLAMF7 es un receptor que promueve la activación de células NK, sin embargo, no son claros los mecanismos subyacentes. Es por eso que en este trabajo nos enfocamos en evaluar el patrón de expresión de SLAMF7 en diferentes subpoblaciones y estadios de activación de células NK humanas, así como determinar su participación en eventos tales como citotoxicidad, adhesión, polarización y degranulación celular. Finalmente, con el objetivo de iniciar la caracterización de los mecanismos intracelulares en células NK humanas, evaluamos la dependencia de las funciones mediadas por SLAMF7 por algunas proteínas de señalización. Para lograr estos objetivos, se expresó ectópicamente SLAMF7 en células HeLa, las cuales sirvieron como un modelo de células que son susceptibles a la función lítica de las células NK. Se realizaron varios ensayos funcionales basados en el uso de citometría de flujo y microscopía confocal. Nuestros resultados mostraron que la expresión basal de SLAMF7 está regulada en función del estadio de activación de las células NK. Además, se observó que la presencia del ligando natural de SLAMF7 en células HeLa favorece su lisis con respecto a células que no expresan SLAMF7, este incremento en la función citotóxica promovida por SLAMF7 correspondió con una mayor degranulación, la cual fue dependiente de la participación de PLC-γ, y en un menor impacto, de PI3K. En contraste a la degranulación, como principal mecanismo que favorece la función lítica de las células NK, SLAMF7 no tuvo un impacto significativo en la adhesión o en la polarización celular. En conclusión, este trabajo demuestra que en células NK humanas, SLAMF7 promueve señales de activación que inciden principalmente en influenciar la degranulación celular a través de un mecanismo dependiente de PLC-γ y, consecuentemente, contribuye a regular eventos efectores específicos durante la respuesta citotóxica de las células NK. | es_MX |
| dc.description | Abstract NK cells play an essential role during the antitumoral and antiviral response through two main mechanisms: secretion of cytokines and release of granzyme and perforin (cytotoxic function). Therefore, understanding the cellular and molecular mechanisms that govern the effector functions of NK cells is very important to know how these cells fight off different target cells. The cytotoxic function of NK cells is regulated by several surface activating and inhibitory receptors, but the exact function of some of these receptors during the elimination of target cells is yet to be determined. SLAM receptors are in the group of transmembrane proteins exclusively expressed by hematopoietic cells. 2B4 and SLAMF7 are two of the SLAM receptors best studied in NK cells. In that sense, it has been demonstrated that the ligand expression of SLAMF7 in target cells increase the cytotoxic function of mouse NK cells and this effect is dependent of the presence of the adaptor protein EAT-2. Many studies suggest that this receptor regulates the cytotoxic function in human NK cells. On one hand, the cross-linking of SLAMF7 using specific monoclonal antibody triggers the cytotoxic function of NK cells. On the other hand, the expression of SLAMF7 on target cells lacking MHC-I molecules are killed more efficiently by NK cells. These results suggest that SLAMF7 plays an important role during the activation of NK cells, however, the mechanisms that lead to those functions are unknown. In this work we were focused on evaluate the expression of SLAMF7 in different activations states of in human NK cells. We also evaluated the impact of SLAMF7 in cell adhesion, cell polarization and cell degranulation during the engagement of SLAMF7 in human NK cells. Finally, we also evaluated the participation of PLC-γ and PI3K during the engagement of SLAMF7 in human NK cells. We used a target cells expressing the SLAMF7 ligand and through several functional assays based on the use of flow cytometry and confocal microscopy, we evaluated the impact of SLAMF7 in human NK cells. We found that NK cells express SLAMF7 basally, but their activation in vitro significantly increased the expression of SLAMF7. Likewise, we demonstrated that physiological ligand of SLAMF7, expressed by target cells, increase the cytotoxic function of human NK cells. This result was primarily determined on the ability of SLAMF7 to promote NK cell degranulation rather than cell adhesion or granule polarization. Additionally, this outcome was dependent on PLC-γ, and with less impact on PI3K. In conclusion, we generated convincing evidence that SLAMF7 regulate discrete cellular events (cell degranulation) rather than global cellular process during the activation of human NK cells. | es_MX |
| dc.format | pdf - Adobe PDF | es_MX |
| dc.language | spa - Español | es_MX |
| dc.publisher | El autor | es_MX |
| dc.rights | openAccess - Acceso Abierto | es_MX |
| dc.subject | 2 - BIOLOGÍA Y QUÍMICA | es_MX |
| dc.subject.other | 24 - CIENCIAS DE LA VIDA | es_MX |
| dc.title | Función y mecanismos de acción de SLAMF7 (CRACC) en células citotóxicas humanas | es_MX |
| dc.type | doctoralThesis - Tesis de doctorado | es_MX |
| uaem.unidad | Instituto de Investigación en Ciencias Básicas y Aplicadas (IICBA) - Instituto de Investigación en Ciencias Básicas y Aplicadas (IICBA) | es_MX |
| uaem.programa | Doctorado en Ciencias - Doctorado en Ciencias | es_MX |
| dc.type.publication | acceptedVersion | es_MX |
| dc.audience | researchers - Investigadores | es_MX |
| dc.date.received | 2022-05-04 |
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Se trata de tesis realizadas por estudiantes egresados de programas de posgrado de nuestra institución.