Evaluación del efecto antitumoral de la combinación de l-histidine amida derivada de anfotericina b con antineoplásicos en células a549

RUBI ESCOBAR RESENDIZ

RESUMEN El cáncer de pulmón es la primera causa de muerte, por cáncer, en el mundo. El diagnóstico y tratamiento de la enfermedad es tardío y el nivel de respuesta al tratamiento es pobre. El cáncer se origina a partir del daño al ADN, esto provoca una pérdida en la regulación del ciclo celular, inhibición de la apoptosis y proliferación incontrolada. Estudios previos han demostrado que la anfotericina B (AmB) tiene efectos antineoplásicos y potencia el efecto de otros antineoplásicos. L-Histidine Amida Derivada de AmB (A21) es un derivado de AmB desarrollado por académicos de la UAEM, la UNAM y el CINVESTAV. Estudios preclínicos previos han demostrado que el A21 tiene la misma eficacia antimicótica y es menos tóxico que la AmB. Por lo cual, es importante saber si el derivado produce los mismos efectos antineoplásicos que su precursor. Se usaron células de carcinoma de pulmón de células no pequeñas (A549). Las células Se trataron con: cisplatino, carboplatino, AmB, A21, cisplatino+AmB, cisplatino+A21, carboplatino+AmB, carboplatino+AmB. Se evaluó la citotoxicidad y proliferación celular mediante la técnica MTT. Se identificó el tipo de muerte celular mediante la tinción con bromuro de etidio y naranja de acridina. Se evaluó el daño al ADN (HSC DNA Damage kit) y el efecto sobre la capacidad invasiva celular. De cada fármaco individual se obtuvieron concentraciones inhibitorias 25 (IC25). Las IC25 encontrados fueron: cisplatino 10, carboplatino 515, AmB 29 y A21 67 μg/ml, estas concentraciones se usaron para hacer las combinaciones. En la evaluación de la citotoxicidad y proliferación se observó que la combinación cisplatino+A21 redujo un 40 y 70% aproximadamente la viabilidad y la tasa de proliferación respectivamente, mientras que el tratamiento carboplatino+A21 redujo un 50 y 95% aproximadamente, por otro lado, el tratamiento A21 redujo un 40% la tasa de proliferación comparado con el control. Se identifico que los tratamientos A21, cisplatino+A21 y Carboplatino+A21 indujeron muerte por apoptosis aproximadamente en un 45, 75 y 80% de células, respectivamente. En el ensayo de invasión se obtuvo que los tratamientos A21, cisplatino+A21 y Carboplatino+A21 redujeron un 40, 40 y 70% la invasión de células, en comparación al control positivo. El derivado A21 fue más e igual de efectivo que la AmB para inhibir invasión celular e inducir apoptosis, respectivamente. El tratamiento cisplatino+A21 produjo mayor efecto citotóxico, anti-proliferativo, genotóxico e indujo mayor apoptosis que el derivado solo, pero menos efecto citotóxico que cisplatino+AmB. El tratamiento carboplatino+A21 fue más efectivo que la combinación de carboplatino+AmB, y que el A21 solo y combinado con cisplatino. Con base a los resultados obtenidos se puede concluir que el derivado A21 tiene efectos antitumorales y produce un efecto sinergista con cisplatino y carboplatino en células A549.

ABSTRACT Lung cancer is the leading cause of death, due to cancer, in the world. The diagnosis and treatment of the disease is late and the level of response to treatment is poor. Cancer originates from DNA damage, this causes a loss in cell cycle regulation, inhibition of apoptosis and uncontrolled proliferation. Previous studies have shown that amphotericin B (AmB) has antineoplastic effects and potentiates the effect of other antineoplastic drugs. LHistidine Amide Derivative from AmB (A21) is a derivative of AmB developed by academics of the UAEM, UNAM and CINVESTAV. Previous preclinical studies have shown that A21 has the same antifungal efficacy and is less toxic than AmB. Therefore, it is important to know if the derivative produces the same antineoplastic effects as its precursor. Non-small cell lung carcinoma cells (A549) were used. Cells were treated with: cisplatin, carboplatin, AmB, A21, cisplatin + AmB, cisplatin + A21, carboplatin + AmB, carboplatin + AmB. Cytotoxicity and cell proliferation were evaluated using the MTT technique. The type of cell death was identified by staining with ethidium bromide and acridine orange. DNA damage (HSC DNA Damage kit) and the effect on cellular invasive capacity were evaluated. In each individual drug, 25 inhibitory concentrations (IC25) were obtained. The IC25 found were: cisplatin 10, carboplatin 515, AmB 29 and A21 67 μg / ml, these concentrations were used to make the combinations. In the evaluation of cytotoxicity and proliferation it was observed that the cisplatin+A21 combination reduced approximately 40 and 70% approximately viability and proliferation rate respectively, while carboplatin+A21 treatment reduced approximately 50 and 95%, on the other hand, the A21 treatment reduced the proliferation rate by 40% compared to the control. It was identified that treatments with A21, cisplatin+A21 and Carboplatin+A21 induced apoptotic death in approximately 45, 75 and 80% of cells, respectively. In the invasion test it was obtained that treatments A21, cisplatin+A21 and Carboplatin+A21 reduced cell invasion by 40, 40 and 70%, compared to the positive control. The A21 derivative was more and equally effective than the AmB to inhibit cell invasion and induce apoptosis, respectively. The cisplatin+A21 treatment produced a greater cytotoxic, anti-proliferative, genotoxic effect and induced greater apoptosis than the derivative alone, but less cytotoxic effect than cisplatin+AmB. The carboplatin+A21 treatment was more effective than the combination of carboplatin+AmB, and that the A21 alone and combined with cisplatin. Based on the results obtained, it can be concluded that derivative A21 has antitumor effects and produces a synergistic effect with cisplatin and carboplatin in A549 cells.

Tipo de documento: Tesis de maestría

Formato: Adobe PDF

Audiencia: Investigadores

Idioma: Español

Área de conocimiento: MEDICINA Y CIENCIAS DE LA SALUD

Campo disciplinar: CIENCIAS MÉDICAS

Nivel de acceso: En Embargo