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Caracterización y expresión heteróloga de proteasas y fosfolipasas del veneno de bothrops ammodytoides y sus propiedades inmunogénicas
| dc.rights.license | http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0 - Atribución-NoComercial | es_MX |
| dc.contributor | ELBA CRISTINA VILLEGAS VILLARREAL | es_MX |
| dc.contributor.author | HERLINDA CATALINA CLEMENT CARRETERO | es_MX |
| dc.contributor.other | director - Director | es_MX |
| dc.coverage.spatial | MEX - México | es_MX |
| dc.date | 2018-12-19 | |
| dc.date.accessioned | 2021-04-15T15:12:05Z | |
| dc.date.available | 2021-04-15T15:12:05Z | |
| dc.identifier.uri | http://riaa.uaem.mx/handle/20.500.12055/1480 | |
| dc.description | Resumen En el continente americano los vipéridos (“víboras”) son los responsables de la mayoría de los accidentes ofídicos, principalmente por los géneros Bothrops y Crotalus 1. Los anticuerpos utilizados para los antivenenos con fines terapéuticos son preparados de caballos por inoculación de venenos completos. Sin embargo, los venenos de serpientes contienen una amplia mezcla de componentes farmacológicamente activos. Aunque, no todos los componentes son igualmente importantes para la producción de anticuerpos. Por lo tanto, la identificación de las proteínas con capacidad inmunógenica, y además neutralizante, pueden ayudar a definir los inmunógenos, para el desarrollo de antivenenos más eficientes. Sin embargo, no siempre se cuenta con las cantidades deseadas de inmunógenos y es por esto que el uso de proteínas recombinantes para ser utilizadas como inmunogénos se vuelve importante. Los objetivos principales en este trabajo fueron identificar y caracterizar bioquímicamente al menos una proteasa y una fosfolipasa del veneno de Bothrops ammodytoides, y expresarlas de forma heteróloga, para generar anticuerpos con capacidad de reconocimiento hacia dichas proteínas nativas. Durante el desarrollo del trabajo se logró la clonación y la expresión de tres enzimas: PLA2, serinoproteasa, así como de una metaloproteasa utilizando el vector pQE30. La actividad biológica de las enzimas recombinantes fue de baja a nula; esto debido, a que no logró obtenerse un plegamiento satisfactorio de dichas enzimas. Esto es, la purificación de cada una de las enzimas mostró varias fracciones con masas moleculares similares, indicando indirectamente que cada fracción correspondía a un plegamiento diferente. Independientemente de estos resultados, se inmunizaron animales con el fin de obtener anticuerpos que reconocieran a las enzimas nativas. Se obtuvieron IgG de caballos inmunizados con la PLA2 y serinoproteasa recombinante, siendo la PLA2 recombinante la que mejores títulos generó. Los anticuerpos anti-fosfolipasas recombinante redujeron la actividad de fosfolipasa y hemolítica en el veneno de Bothrops ammodytoides. Por otro lado, se generaron anticuerpos de conejo inmunizados contra las tres proteínas recombinantes. Igualmente se encontró que la PLA2 y serinoproteasa recombinantes fueron mejores inmunógenos para la producción de anticuerpos en conejos. Como resultado general, se obtuvieron anticuerpos con poco reconocimiento a los venenos completos del género Bothrops, pero se concluye que se pueden obtener anticuerpos de proteínas recombinantes tanto en caballos como en conejos que reducen las actividades enzimáticas de venenos de Bothrops. | es_MX |
| dc.description | Abstract In the American continent, the viperids ("vipers") are responsible for most of the ophidic accidents, mainly by the Bothrops and Crotalus genera 1. Antibodies used for antivenoms toward therapeutic purposes are built in horses by inoculation of complete poisons. However, snake venoms contain a broad mixture of pharmacologically active components; at the same time, not all the components are equally important for the production of antibodies. Thus, the identification of proteins with immunogenic capacity, and also neutralizing, can help define immunogens, for the development of more efficient antivenoms. Nevertheless, the amounts of immunogens are not always available, and this is the reason for using recombinant proteins as immunogens. Our porpoises in this work were to identify and biochemically characterize, at least one protease and one phospholipase from Bothrops ammodytoides snake venom. Subsequently, obtain them in a recombinant way, in order to generate antibodies with recognition capacity towards their native proteins. During the development of the work, the cloning and expression of three enzymes were achieved: PLA2, serine protease, as well as a metalloprotease using the pQE30 vector. The Biological activity of the recombinant enzymes was low to none; mainly due to inappropriate folding of those enzymes. After enzymes’ purification, we could find some different fractions with similar molecular masses, indicating indirectly, that each fraction corresponded to a singular folding. Regardless of these results, animals were immunized in order to obtain antibodies that recognize native enzymes. IgG from immunized horses with recombinant enzymes (PLA2 and serine protease) were obtained, being the PLA2 the one that better titles generated. Anti-phospholipases antibodies reduced hemolytic activity in Bothrops ammodytoides venom. On the other hand, rabbit antibodies were obtained when the animal was immunized with all three recombinant proteins. It was also found that recombinants PLA2 and serine protease were better immunogens for the production of antibodies in rabbits. As a general result, antibodies were obtained but with little recognition toward the complete poisons of the genera Bothrops; however, we could obtain antibodies from recombinant proteins as well in horses as in rabbits, and those antibodies are able to reduce the enzymatic activities of Bothrops. | es_MX |
| dc.format | pdf - Adobe PDF | es_MX |
| dc.language | spa - Español | es_MX |
| dc.publisher | El autor | es_MX |
| dc.rights | openAccess - Acceso Abierto | es_MX |
| dc.subject | 2 - BIOLOGÍA Y QUÍMICA | es_MX |
| dc.subject.other | 24 - CIENCIAS DE LA VIDA | es_MX |
| dc.title | Caracterización y expresión heteróloga de proteasas y fosfolipasas del veneno de bothrops ammodytoides y sus propiedades inmunogénicas | es_MX |
| dc.type | doctoralThesis - Tesis de doctorado | es_MX |
| uaem.unidad | Centro de Investigación en Biotecnología (CEIB) - Centro de Investigación en Biotecnología (CEIB) | es_MX |
| uaem.programa | Doctorado en Ciencias Naturales - Doctorado en Ciencias Naturales | es_MX |
| dc.type.publication | acceptedVersion | es_MX |
| dc.audience | researchers - Investigadores | es_MX |
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